标准品浓度分别为1×108、1×107、1×106、1×105、1×104、1×103copies/μl。检测结束后,以各标准品的浓度log值(x轴)对其相应ct值(y轴)作图,绘制标准曲线,标准曲线如图3所示,其中cav2相关系数为r2=,误差较小,标准曲线可用,由标准曲线得到的线性方程为:y=,cdv相关系数为r2=,误差较小,标准曲线可用,由标准曲线得到的线性方程为:y=,cpv相关系数为r2=,误差较小,标准曲线可用,由标准曲线得到的线性方程为:y=,cpiv相关系数为r2=,青山区本地细小病菌价钱,误差较小,标准曲线可用,由标准曲线得到的线性方程为:y=。因此标准曲线可用于对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行四重实时荧光定量pcr检测。、对cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行四重实时荧光定量pcr检测用本发明的四重实时荧光定量pcr检测方法对从金宇保灵生物药品有限公司疫苗研究室收集的10份犬源病料(待测样品)提取的dna或rna(检测样)进行检测,以灭活的cav-ii,青山区本地细小病菌价钱、cpv、cdv和cpiv细胞培养物提取的dna或rna为阳性对照样,以无酶水为阴性对照样,根据实时荧光定量pcr检测结果,对样本中cav-ii、cpv、cdv和cpiv进行定性判定,并对bingdu的拷贝数进行定量。具体检测方法包括以下步骤:1)以从待测样品中提取的基因组dna或rna为模板。
单位g/100ml)百分比浓度或体积/体积(v/v,单位ml/100ml)百分比浓度。实施例中描述到的各种生物材料的取得途径*是提供一种实验获取的途径以达到具体公开的目的,不应成为对本发明生物材料来源的限制。事实上,所用到的生物材料的来源是广大的,任何不违反法律和道德伦理能够获取的生物材料都可以按照实施例中的提示替换使用。所用引物由上海生工有限公司合成;所用探针由上海生工基因公司合成。实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施,给出了详细的实施方式和具体的操作过程,实施例将有助于理解本发明,但不应作为对本发明内容的限制。实施例1、设计引物和taqman探针从ncbi的核酸数据库genbank(.)分别检索获得cavii型的hexon区域基因(cavii型genbank号:,列表中sedid**)的序列、cdv的h基因(cdvgenbank号:,序列表中sedidno:2)的序列、cpv型的vp2基因(cpvgenbank号:,序列表中sedidno:3)的序列、cpiv型的np基因(cpivgenbank号:,序列表中sedidno:4)的序列,用dnaman软件进行比对后,根据引物、taqman探针设计原则,在充分考虑四种bingdu保守区的差异的基础上,**终确定:cavii的检测序列为ii型cavhexon基因5’端第1765-1960位碱基,序列表中sedidno:5所示。
发现本病应立即进行隔离饲养。防止病犬和病犬饲养人员与健康犬接触,对犬舍及场地用2%火碱水或10-20%漂白粉等反复消毒。要特别提醒的是,如果您家曾有发生此病的小狗,即使环境已经消毒,也千万不要再把没有打过全部疫苗的其他小狗带回家,否则很快就会传染发病。临床上主要是对症治聊配合高免血清和单克隆抗体治聊(针对早期病情较为轻,单克隆抗体效果高于高免血清)。成犬治yu率高于幼犬,串种犬治yu率高于血统犬(血统犬大多为近亲交配所得,免疫li低下),幼犬预后谨慎。在病发后严格控制饮食,禁食禁水,通过输液等方式防zhituo水。由于此时病犬肠胃功能紊乱,功能停止,喂食只能增加负担,导致病情严重,口服葡萄糖和氯化钠等方式无任何治聊意义,切勿强灌。病犬在四十八小时内不再呕吐腹泻,可试探性喂食易消化食物,比如泡软狗粮,小米汤。止血常维生素K3、安络血或止血敏;一般4~6小时一次,可同时或单独应用。止吐常用爱茂尔、胃复安等。止泻可用泻痢停、药用碳、腐敏、维迪康等。控制继发染上可用kangjun类药wu,如青霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、丁胺卡那霉素、硫suan小诺霉素、四环素和红霉素等。强心主要用强尔心、樟脑磺酸钠或***等。
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