蛋白质的处理:胶体金标记蛋白的制备:胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值,在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下,浙江单通道胶体金读数仪,二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时,则会聚集而失去结合能力。除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。待标记蛋白溶液的制备将待标记蛋白预先对0.005Mol/LpH7.0NaCl溶液中4℃透析过夜,以除去多余的盐离子,然后100000g4℃离心1h,去除聚合物。待标胶体金溶液的准备以0.1Mol/LK2CO3或0.1Mol/LHCl调胶体金液的pH值。标记IgG时,调至9.0;标记McAb时,浙江单通道胶体金读数仪,调至8.2;标记亲和层析抗体时,调至7.6;标记SPA时,调至5.9~6.2;标记ConA时,调至8.0;标记亲和素时,调至9~10.由于胶体金溶液可能损坏pH计的电板,浙江单通道胶体金读数仪,因此,在调节pH时,采用精密pH试纸测定为宜。由于盐类成分能影响金溶胶对蛋白质的吸附,并可使溶胶聚沉,故致敏前应先对低离子强度的水透析。必须注意,蛋白质溶液应确保澄清无细小微粒,否则应先用微孔滤膜或超速离心除去。一般情况下应避免磷酸根离子和硼酸根离子的存在,因为它们都可吸附于颗粒表面而减弱胶体金对蛋白质的吸附。内置条形码识别模块,支持试剂条项目自动识别功能。浙江单通道胶体金读数仪
免疫胶体金技术作为一种新型免疫标记技术,已广泛应用于众多领域,如心血管疾病、疾病、消化系统疾病、检测等。通过与电镜/光镜、流式细胞仪、凝集试验、蛋白印记技术、免疫层析等实验技术相结合,可定量或半定量测定内分泌、蛋白质、多糖、核酸、神经递质、受体、细胞因子、细胞表面抗原、、血药浓度等各种生物活性物质。目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法(immunochroma-tography)和快速免疫金渗滤法(Dot-immuogold filtration assay,DIGFA),用于检测HB-sAg、HCG、HIV、CK-MB 、MYO、cTnI等,具有简单、快速、准确和无污染等优点。而将胶体金标记技术与床旁检测诊断技术(pinit-of_care testing,POCT)相结合,能快速获得结果,操作简单且设备小型化便于携带,能有效指导医师制订治疗方案,病人也能及时了解自己的病情。这一技术适应现代社会发展的需要,并为床旁检测诊断技术开拓了新的发展空间。辽宁金标免疫层析读数仪代理商读数仪 ,请找无锡天纵易骏!
胶体金标记蛋白的纯化:(2)凝胶过滤法:此法只适用于以BSA作稳定剂的胶体金蛋白结合物的纯化。将胶体金蛋白结合物装入透析袋,在硅胶中脱水浓缩至原体积的1/5~1/10.再经1500r/min离心20min.取上清加至SephacrylS-400(丙烯葡聚糖凝胶S-400)层析柱分别纯化。层析柱为0.8cm×20cm,加样量为床体积的1/10,以0.02Mol/LPBS液洗脱(内含0.1%BSA,0.05%NaN3,pH8.2者用IgG标记物),流速为8ml/h.按红色深浅分管收集洗脱液。一般先滤出的液体为微黄色,有时略混浊,内含大颗粒聚合物等杂质。继之为纯化的胶体金蛋白结合物,随浓度的增加而红色逐渐加深,清亮透明,然后洗脱出略带黄色的为标记的蛋白组分。将纯化的胶体金蛋白结合物过滤除菌、分装,4℃保存。可得到70%~80%的产量。
胶体金制备大体可分为分散法和还原法两种,目前多采用还原法制备胶体金,主要包括:白磷还原法,抗坏血酸还原法,枸橼酸三钠还原法,乙醇—超声波还原法,硼氢化钠还原法和鞣酸-枸橼酸钠还原法等方法。白磷还原法制得的胶体金颗粒直径在3nm左右,颗粒大小均匀性好,但白磷易燃易爆,配置时需十分小心。枸橼酸三钠还原法在实践中常用,其工艺过程简单,重复性好,而且可通过调整溶液中枸橼酸三钠浓度,来控制胶体金颗粒大小。乙醇—超声波还原法在实践中很少应用,一方面是由于工艺过程不好控制,重复性差,另一方面是所制金颗粒较小,除了免疫组化电镜技术中用小颗粒胶体金外,免疫检测技术中所用胶体金颗粒一般在50nm左右。硼氢化钠还原法在实践中也很少应用,一方面是由于工艺过程不好控制,重复性差,另一方面是所制金颗粒较小,除了免疫组化电镜技术等研究试验使用外,金标免疫检测技术中很少使用。鞣酸-枸橼酸钠还原法为常用方法之一,可通过鞣酸的浓度来控制胶体金颗粒大小。但要注意:鞣酸溶液一定要避光保存,温度必须控制在60℃,否则会影响胶体金的均一性。 无锡天纵易骏供应读数仪 ,欢迎新老客户来电!
常用的免疫胶体金检测技术: (1)免疫胶体金光镜染色法 细胞悬液涂片或组织切片,可用胶体金标记的抗体进行染色,也可在胶体金标记的基础上,以银显影液增强标记,使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面,可明显增强胶体金标记的敏感性。 (2)免疫胶体金电镜染色法 可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或组织超薄切片结合,然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。 斑点免疫金渗滤法 (3)应用微孔滤膜(如膜)作载体,先将抗原或抗体点于膜上,封闭后加待检样本,洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。 (4)胶体金免疫层析法 将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上,胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上,当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后,通过毛细作用向前移动,溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应,当移动至固定的抗原或抗体的区域时,待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留,聚集在检测带上,可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条,使用十分方便。层析法免疫胶体金检测试剂是免疫金标记技术和抗原抗体反应相结合而形成的一种应用形式。北京自动化读数仪厂家直销
通线方式:USB接口,RS232,网口、WIFI数据传输。浙江单通道胶体金读数仪
标记:胶体金与蛋白质(IgG)的结合:将胶体金和IgG溶液分别以,电磁搅拌IgG溶液,加入胶体金溶液,继续搅拌10min,加入一定量的稳定剂以防止抗体蛋白与胶体金聚合发生沉淀。常用稳定剂是5%胎牛血清(BSA)和1%聚乙二醇(分子量20KD)。加入量:5%BSA使溶液终浓度为1%;1%聚乙二醇加至总溶液的1/10.在接近并略为高于蛋白质等电点的条件下标记是比较合适的,在此情况下蛋白质分子在金颗粒表面的吸附量大。步骤:①用0、1mol/LK2CO3或(标记SPA时调到)。②于100ml金溶胶中加入合适标记量的蛋白质溶液(体积为2~3ml),搅拌2~3分钟。③加入5ml1%PEG20000溶液。④于10000~100000g离心30~60分钟(根据粒径大小选择不同离心条件),小心吸去上清液(切忌倾倒)。⑤将沉淀悬浮于一定体积含~,离心沉淀后,再用同一缓冲液恢复,浓度以A1cm/540nm=,以,置4℃保存。⑥包被后的金溶胶也可浓缩后于SephadexG-200柱进行凝胶层析分离纯化,以含%BSA的缓冲溶液洗通常用IgG包被的金溶胶洗脱液pH为。 浙江单通道胶体金读数仪
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