金标免疫试验的原理将氯金酸(HAuCl4)用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒(胶体金)标记抗体,(或金黄色葡萄球菌A蛋白SPA)。金标为一种催化剂,经还原剂(如对苯二酸)处理,将显影剂中的银离子还原成不溶性金属银,沉淀在每个金颗粒的周围,银沉淀在光镜下可清楚地显示。滴金免疫实验原理同一般免疫斑点实验,中国香港单通道胶体金读数仪在线议价,也是用已知抗原或抗体包被硝酸纤维素膜,中国香港单通道胶体金读数仪在线议价,再用金标记抗体或抗原进行快速测定。临床应用的有两种方法:金标一步法(层析法)和金标二步法(斑点渗漏法)。具体讲即用两个人HCG—β单克隆抗体,中国香港单通道胶体金读数仪在线议价,一个抗体吸附于硝酸纤维素薄膜(NC膜)上,另一抗体结合于金溶胶颗粒表面。尿中HCG先与NC膜上的抗体-结合,然后再与金标单抗溶液反应,形成抗体一HCG一金标抗体的加心式复合物.红色的金斑点.无锡天纵易骏的读数仪物美价优,欢迎新老客户致电!中国香港单通道胶体金读数仪在线议价
胶体性质胶体金颗粒大小多在1~100nm,微小金颗粒稳定地、均匀地、呈单一分散状态悬浮在液体中,成为胶体金溶液。胶体金因而具有胶体的多种特性,特别是对电解质的敏感性。电解质能破坏胶体金颗粒的外周永水化层,从而打破胶体的稳定状态,使分散的单一金颗粒凝聚成大颗粒,而从液体中沉淀下来。某些蛋白质等大分子物质有保护胶体金、加强其稳定性的作用。呈色性微小颗粒胶体呈红色,但不同大小的胶体呈色有一定的差别。小的胶体金(2~5nm)是橙黄色的,中等大小的胶体金(10~20nm)是酒红色的,较大颗粒的胶体金(30~80nm)则是紫红色的。根据这一特点,用肉眼观察胶体金的颜色可粗略估计金颗粒的大小。近10多年来胶体金标记已经发展为一项重要的免疫标记技术.胶体金免疫分析在药物检测、生物医学等许多领域的研究已经得到发展,并越来越受到相关研究领域的重视.光吸收性胶体金在可见光范围内有一单一光吸收峰,这个光吸收峰的波长(λmax)在510~550nm范围内,随胶体金颗粒大小而变化,大颗粒胶体金的λmax偏向长波长,反之,小颗粒胶体金的λmax则偏于短波长,表1所列为部分胶体金的λmax。重庆台式胶体金读数仪报价可应用于海关检验检疫、环境监测、食品安全、临床诊断、药物筛选、重大疾病诊断检测等。
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胶体金标记蛋白的纯化(1)超速离心法:根据胶体金颗粒的大小,标记蛋白的种类及稳定剂的不同选用不同的离心速度和离心时间。用BSA做稳定剂的胶体金—羊抗兔IgG结合物可先低速离心(20nm金胶粒用1200r/min,5nm金胶粒用1800r/min)20min,弃去凝聚的沉淀。然后将5nm胶体金结合物用6000g,4℃离心1h;20nm~40nm胶体金结合物,14000g,4℃离心1h.仔细吸出上清,沉淀物用含1%BSA的PB液(含0.02%NaN3),将沉淀重悬为原体积的1/10,4℃保存。 如在结合物内加50%甘油可贮存于-18℃保存一年以上。为了得到颗粒均一的免疫金试剂,可将上述初步纯化的结合物再进一步用10%~30%蔗糖或甘油进行密度梯度离心,分带收集不同梯度的胶体金与蛋白的结合物。读数仪品质可靠,欢迎咨询无锡天纵易骏了解!重庆台式胶体金读数仪报价
胶体金标记 吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷,与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。中国香港单通道胶体金读数仪在线议价
应用在制备免疫金结合物的特异性抗体的稳定性主要取决于检测试验的技术条件。对于侧向层析分析,比较好的抗体形式是采用一般的单克隆配对。在这类检测分析中,一种单克隆抗体被标记胶体金作为指示剂,而另一种被固定于硝酸纤维素膜上作为捕获剂。每种抗体对于抗原表面的不同反应决定簇都应该是特异识别,并且这些抗原决定簇在空间结构上距离较远。多克隆抗体也可以被使用,但至少是必须经过protein-A柱层析纯化。在多数情况下,抗体经亲和层析纯化后能制备出具有较高灵敏度和特异性的结合物。这当然取决于符合试验检测可接受交叉反应的技术要求。亲和层析纯化硫酸铵沉淀法或DEAE纯化的血清,含有大量的杂蛋白将竞争性结合胶体金颗粒表面的结合位点。这些杂蛋白拥有高含量的控制蛋白与胶体金结合的三种氨基酸残基,很容易与裸露的胶体金颗粒结合。出现这种情况时,检测系统中指示剂的灵敏度水平降低。如果采用经A蛋白或G蛋白柱层析纯化的抗体,然后IgG片段中可能含有大量的非特异性的IgG,而不是需要的特异性IgG.所有的IgG将与胶体金结合,结果可能是低灵敏度。中国香港单通道胶体金读数仪在线议价
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