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免疫荧光是一种将抗原抗体结合反应与生物标记技术相结合的技术,在科研及临床上有着较广应用。普通的免疫荧光技术在对抗原含量进行测定时存在一定的局限性,在生物流体和血清中的许多复合物和蛋白本身就可以发荧光,用普通荧光素来检测生物样品时,蛋白质本身产生的荧光会对实验产生干扰,实验检测的灵敏度严重下降。为了解决这一问题,1983年SOINI和KOJOLA提出以镧系元素标记为示踪螯合物和荧光测量相结合,建立了时间分辨荧光分析技术。时间分辨方式的免疫荧光分析方法可以对蛋白质、酶以及同位素等物质进行标记,并且不再受检测物种自然荧光的干扰。江苏快速检测荧光分析仪定制时间分辨荧光免疫分析是在免疫荧光分析的基础上发展的一种新型超微量物质免疫分析。
荧光法是一种非常有用的工具,各种各样的分析领域都在利用它。由于它具有高灵敏度、好的选择性以及可提供多参数信息(如,荧光强度、荧光寿命、荧光各向异性)等特点,所以被多次用于生物制药研究、临床诊断、宇宙空间环境监测、免疫分析中分子间作用原理研究、DNA序列分析、荧光原位杂交以及细胞成分分析等。镧系系复合物由于其特有的荧光特性而受到关注,特别是在临床生化分析中。利用镧系元素的荧光特性,构建时间分辨荧光免疫分析(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)试剂以及创建新的灵敏度高的荧光免疫分析方法(fluoroimmunoassay)是当今临床生化的主要研究方向。
荧光偏振免疫测定:荧光物质经单一平面的偏振光蓝光(波长485nm)照射后,可吸收光能跃入激发态;在恢复至基态时,释放能量并发出单一平面的偏振荧光(波长525nm)。偏振荧光的强度与荧光物质受激发时分子转动的速度成反比。大分子物质旋转慢,发出的偏振荧光强;小分子物质旋转快,其偏振荧光弱。利用这一现象建立了荧光偏振免疫测定(floutescencepolarizationimmunoassay,FPIA),用于小分子物质特别是药物的测定。FPIA的 试剂 为荧光素标记的药物和抗药物的 抗体 ,模式为均相竞争法,标本中的药物与荧光标记的药物与一定量的 抗体 竞争结合。反应平衡后,与抗体结合的荧光标记药物的量与标本中药物浓度的量呈反比。由于抗体的分子量远大于药物的分子量,游离的荧光标记药物与结合抗体的荧光标记药物所产生的偏振荧光强度相差甚远。因此在FPIA中测定的偏振荧光强度与标本中药物的浓度呈反比。无锡天纵易骏的荧光分析仪物美价优,有想法不要错过!
荧光免疫法:原理是应用一对单克隆抗体的夹心法。底物用磷酸-4-甲基伞形酮,检测产物发出的荧光,荧光强度与Mb浓度呈正比,可在8min内得出结果。结果以Mb每小时释放的速率表示(△Mb)表示。该法重复性好,线性范围宽,具有快速、敏感、准确的特点。以双抗夹心法为例,首先将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体。除去未结合抗体,然后加受检标本,使其中的蛋白抗原与固相抗体形成抗原抗体复合物。洗涤除去未结合物,接着加入荧光标记的抗体,使之与抗原特异性结合,形成抗体—抗原—抗体复合物。根据荧光强度,即可对蛋白抗原进行定量。传统的荧光免疫法受本底荧光的干扰较大,时间分辨荧光免疫测定法是以具有特长寿命的稀土金属如铕,作为标记物,加入正常液后激发测定,能有效去除短寿命本底荧光的干扰。荧光免疫分析在医学的基础研究及临床诊断中占重要地位,性能优良的标记探针的开发是发展此技术的重要因素。江苏快速检测荧光分析仪定制
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免疫荧光技术又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展较早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。Coons等于1941年采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术。用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法。这两种方法总称免疫荧光技术,因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合,用于检测或定位各种抗原,也可以与其他蛋白质结合,用于检测或定位抗体,但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用,所以人们习惯称为荧光抗体技术,或称为免疫荧光技术。以荧光抗体方法较常用。河南快速检测荧光分析仪
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